雙縮脲試劑(DTT)是一種常用的還原劑,常用于生物化學和分子生物學實驗中。它可以還原蛋白質和其他生物分子中的二硫鍵,從而使其變為單硫鍵,用于解離和處理蛋白質復合物。
以下是雙縮脲試劑的一般使用方法:
制備溶液:將雙縮脲粉末溶解在適當的緩沖液中,如Tris-HCl緩沖液。通常使用濃度為0.1-1M的雙縮脲溶液,具體濃度可根據實驗需求進行調整。
加進試樣:將需要還原的蛋白質溶液或其他生物樣品加進含有雙縮脲的溶液中,并充分混合。確保試樣與雙縮脲溶液充分接觸,以促進還原反應。
反應條件:根據實驗要求,可以調整反應的時間和溫度。通常在室溫下進行反應,持續10-60分鐘。較高的溫度和較長的反應時間可能會有更徹底的還原效果。
反應停止:反應完成后,可以通過添加還原劑的對應體積的稀酸(如HCl)或直接加進硫氰酸鉀(KCN)來停止還原反應。這可以避免反應繼續進行并保護還原后的樣品。
需要留意的是,雙縮脲試劑在空氣中相對不穩定,輕易氧化失效,所以在使用前應儲存于無濕氣的密封收留器中,并在使用時避免暴露在空氣中。同時,在實驗操縱過程中,要留意安全操縱,并遵循實驗室的相關規章制度。
以上是雙縮脲試劑的一般使用方法,具體的使用步驟和條件會因實驗目的和需求而有所差異。在進行實驗操縱之前,建議參考相關的文獻和實驗方案,確保正確使用雙縮脲試劑以達到預期的實驗效果。
雙縮脲試劑由0.1g/ml氫氧化鈉和0.01g/ml硫酸銅組成。在堿性條件下鑒定蛋白質。使用時先加進A氫氧化鈉NOH2溶液后加進B硫酸銅溶液。CuSO4不要過多加進,不然它的藍色會覆蓋紅紫色
雙縮脲試劑A是質量分數為0.1g/mL的NaOH水溶液;
雙縮脲試劑B是質量分數為0.01g/mL的CuSO4水溶液.
先在待測液中加進雙縮脲試劑A3mL,振蕩均勻(營造堿性環境),再加進1~2滴雙縮脲試劑B,振蕩均勻。假如待測液里含有蛋白質,那么會看到溶液變成紫色。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。
蛋白質的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡合成紫色的絡合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。
雙縮脲試劑由0.1g/ml氫氧化鈉和0.01g/ml硫酸銅組成。
在堿性條件下鑒定蛋白質。使用時先加進A氫氧化鈉NOH2溶液后加進B硫酸銅溶液。CuSO4不要過多加進,不然它的藍色會覆蓋紅紫色
雙縮脲反應是指具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物在堿性條件下與Cu2+反應,天生紅紫色的絡合物.所有的蛋白質均有此顯色反應.雙縮脲試劑就是指能與具有兩個以上肽鍵的化合物發生紅紫色顯色反應的試劑.它是NaOH和CuSO4兩種溶液.在實驗過程中,先在含蛋白質的溶液中加進等體積的NaOH溶液,混合均勻后,再滴幾滴CuSO4溶液(量較少).即先后加進NaOH和CuSO4溶液.假如在NaOH中滴幾滴CuSO4溶液混合后,再加進到含蛋白質的溶液中,混合液中就沒有Cu2+,顯色反應就不會發生.除-CONH-有此反應外,-CONH2-,-CH2-,NH2-,-CS-CS-NH2,等基團亦有此反應。
要
雙縮脲試劑是由雙縮脲試劑A(NaOH)和雙縮脲試劑B(CuSO4)兩種試劑組成(雙縮脲試劑A的成分是氫氧化鈉的質量分數為0.1g/mL的水溶液,雙縮脲試劑B的成分是硫酸銅的質量分數為0.01g/mL的水溶液),雙縮脲試劑可以驗證蛋白質的存在。
具體方法是:
先將雙縮脲試劑A加進組織樣液,振蕩均勻(必須營造堿性環境),再加進雙縮脲試劑B,振蕩均勻。假如組織里含有蛋白質,那么會看到溶液變成紫色。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。蛋白質的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡合成紫紅色的絡合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。
雙縮脲(NH2CONHCONH2)是兩個分子脲經180℃左右加熱,放出一個分子氨后得到的產物。
雙縮脲試劑本是用來檢測雙縮脲,因蛋白質中也有-CONH-基也可用于檢驗蛋白質,海運報價 國際快遞,與蛋白質接觸后的顏色呈紫色。
在使用雙縮脲試劑時候,必須留意,必須是先加0.1g/mL氫氧化鈉溶液,再加0.01g/mL硫酸銅的水溶液。(若先加進硫酸銅[CuSO4]溶液,再加進氫氧化鈉[NaOH]溶液,則無法充分制造堿性環境,此時CuSO4會與NaOH發生復分解反應,跨境鐵路 國際物流,天生藍色氫氧化銅[Cu(OH)2]沉淀,導致現象不清,無法較好地達到實驗目的.)
祝你學習進步!
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